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生长激素(GH)重组蛋白

2019.05.15

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重组蛋白的制备
万维网
Shklbio。
Com使用重组DNA在重组蛋白中表达靶基因,重组蛋白在生物鉴定,药物开发和科学研究中发挥重要作用。
产生重组蛋白的方法如下所述。
1
基因扩增(1)引物的合成检索目标蛋白的基因信息,结合蛋白质结构信息,选择全长设计的片段或引物。
跨膜区和复杂的二级结构,应优选避免N-末端或C-末端,越高越好得分的引物和酶切割位点氨基酸序列注意,寻求。使用信息作为载体,核。
在研发部门根据研发经验提出评审后,最终确定并发送给第三方公司进行引物合成。
(2)识别与表达组织特异性组织中根据目标蛋白,用上述引物选择用于PCR扩增的组织特异性RNA的重组基因的克隆设备1)。
进行琼脂糖凝胶电泳后,根据分子量选择目标片段并胶凝并回收。
再次进行PCR扩增以获得大量DNA,并回收PCR产物。
2)酶的消化,根据酶的切割位点连接,消化所需的PCR产物和相应的载体以获得粘性末端的DNA产物,然后进行凝胶电泳。根据目标条的大小收集相应的片段。
将具有相同限制性位点的载体连接到DNA片段转化3),证实该细菌将连接的片段转化为感受态E。
在LB板块的Cori和夜间文化。
选择平板用于PCR确认,并将PCR产物在琼脂糖凝胶中进行电泳。根据目标条带的大小选择相应的细菌溶液用于测序,并且序列被正确保守。
2
蛋白表达(1)通过从蛋白质表达培养选择小数目的菌株,使所表达的蛋白质进行SDS?PAGE以诱导基因表达,感兴趣的蛋白质,确定是否不依赖于大小的表示。靶带实验扩增(2)蛋白质扩增实验400 - 800蛋白菌株成功表达了该试验。
培养并培养ml培养基,并进行SDS-PAGE。根据目标条带的大小成功表达目标蛋白质。在成功的预扩增实验后,进行另外的蛋白质扩增实验,并使用800-1600进行扩增实验。
培养了一半的ml,具体验证与以前相同。
3
由于载体含有his标签,因此使用镍柱进行蛋白质纯化。
一些蛋白质可以形成包涵体。前一个主题详细解释了如何纯化大肠杆菌重组蛋白。将纯化的蛋白质进行SDS-PAGE。
检测BCA等的实验分子量和纯度,纯度为95%或更高。
4?
一旦通过质量检测获得蛋白质,就将其冻干。冷冻干燥后,通过常规蛋白质实验确认并在通过测试后储存。
重组蛋白的制备主要基于上述原理和方法。
以上是原核表达的一个例子。
准备过程中的所有环节都非常重要。不同的蛋白质在涉及靶基因扩增的不同方面存在技术困难,包涵体的形成将导致重组蛋白的研究和开发的困难。
但云?
克隆
公司?凭借多年的研发经验,我们可以提供真核表达系统和哺乳动物细胞表达系统,用户可以根据自己的需要进行选择。。
提示:这不是临床治疗。

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